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本制品是没有外切酶活性的Klenow片段，是大肠杆菌聚合酶I(E.coli.DNA polymerase I)的大片段(Large Fragment)缺失了外切酶活性的突变体。Klenow Fragment，Exo-保留了DNA聚合酶I的5'→3'聚合酶活性，但缺少完整的Klenow酶的5'→3'和3'→5'外切酶活性。

由于Klenow Fragment，Exo-没有外切酶活性，其在末端补平时经常会在3'末端额外加上1个或多个核苷酸，因此不能用于产生平末端而用于后续的连接。


5'突出末端的标记；随机引物法进行DNA标记；Sanger双脱氧法进行DNA测序等。


由大肠杆菌表达，表达基因的来源为突变的polA基因片段。


分子量：约68kDa(单体)。
纯度：不含DNA内切酶，不含RNase。

• 75℃加热10分钟或加入适量EDTA均可导致Klenow Fragment，Exo-失活。
  
• 金属离子螯合剂，无机焦磷酸盐(PPi)，大剂量的无机磷酸盐(Pi)均对Klenow Fragment，Exo-有抑制作用。

37℃，30分钟内，催化10nmol脱氧核糖核苷酸(dNTPs)摻入到多聚核苷酸中所需的酶量定义为1个活性单位。
酶活性检测条件：
67mM potassium phosphate(pH7.4)，6.7mM MgCl₂，1mM 2-mercaptoethanol，0.033mM dATP，0.033mM dTTP，0.4MBq/ml[3H]-dTTP，62.5μg/mL poly(dA-dT)·poly(dA-dT)。

组分	规格
Klenow片段(无外切酶活性，5U/μL)	20μL
10×Reaction Buffer	300μL

保存：-20℃


25mM Tris-HCl(pH7.5)，0.1mM EDTA，1mM DTT，50%(v/v)glycerol。


10×Reaction Buffer：
500mM Tris-HCl(pH8.0 at 25℃)，50mM MgCl₂，10mM DTT。

• 酶使用时宜存放在冰盒内或冰浴上，使用完毕后宜立即放置于-20℃保存。
  
• 本制品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
  
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

• 随机引物法进行DNA标记：
  
  • 参考如下表格设置反应体系：
    

    成分	用量
    DNA	10μL(100ng)
    10×Reaction Buffer	5μL
    125μM random decamer or hexamer primer	10μL
    无核酸酶的去离子水	至40μL
    混匀后沸水浴孵育5～10分钟，立即置于冰浴冷却。进行后续步骤前离心沉淀液体。
    dNTP Mixture(0.25mM each,without the labeled dNTP)	4μL
    [α-32P]-dNTP,～110 TBq/mmol(3000Ci/mmol)	1.85MBq(50μCi)
    Klenow片段	1μL(5U)
    无核酸酶的去离子水	至50μL

  • 按上表设置好反应体系后，轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用Vortex在最低速度轻轻混匀)，随后离心沉淀液体。
    
  • 对于random decamer primer，37℃孵育5分钟；对于random hexamer primer，37℃孵育10分钟。
    
  • 加入4μL 0.25mM dNTP，混匀后37℃孵育5分钟。
    
  • 加入1μL 0.5M EDTA，pH8.0终止反应。
    
  • 取1μL上述液体用于检测标记的效率。
    
  • 用Sephadex G-50或Bio-Gel P-60或其它适当试剂盒纯化标记好的探针。
• 双链DNA 5'突出(5'overhang)末端的标记：
  
  • 参考如下表格设置反应体系：
    

    成分	用量
    Digested DNA	10～15μL(0.1～4μg)
    10×Reaction Buffer	2μL
    [α-32P]-dNTP,～15-30 TBq/mmol(400-800Ci/mmol) 或[α-32P]-dNTP,～110 TBq/mmol(3000Ci/mmol)	0.74 MBq(20μCi) 或2.96 MBq(80μCi)
    dNTP Mixture(2.5mM each,without the labeled dNTP)	2μL
    Klenow片段	0.2μL(1U)
    无核酸酶的去离子水	至20μL

  • 按上述体系配好之后，轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用Vortex在最低速度轻轻混匀)，随后离心沉淀液体。
    
  • 30℃孵育15分钟。
    
  • 75℃孵育10分钟终止反应。
• 其他用途可以参考上述用途或适当的文献资料进行。

相关搜索：Klenow片段(无外切酶活性)，DNA聚合酶，Klenow酶，Klenow Fragment，Exo-